常用缓冲液配置

　实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl (pH7 、4, 7 、6, 8 、0)

　组份浓度:1 M Tris-HCl 配制量:1 L

　配制方法:

　1、 称量 121.1 g Tris 置于 1 L 烧杯中。

　2、 加入约 800 ml 得去离子水,充分搅拌溶解。

　3、 按下表量加入浓盐酸调节所需要得 pH 值。

　PH 值

　浓 HCl

　7、4

　约 70ml

　7、6

　约 60ml

　8、0

　约 42ml

　4、 将溶液定容至 1 L。

　5、 高温高压灭菌后,室温保存。

　注意:应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液得 pH 值随温度得变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液得 pH 值大约降低 0、03 个单位。

　 2)10×TE Buffer (pH7 、4, 7 、6, 8 、0)

　组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量:1 L

　配制方法:

　1、 量取下列溶液,置于 1 L 烧杯中。

　1M Tris－HCl Buffer(PH7、4,7、6,8、0) 100ml

　500mM EDTA(PH8、0)

　20ml

　2、 向烧杯中加入约 800 ml 得去离子水,均匀混合。

　3、 将溶液定容至 1 L 后,高温高压灭菌。

　4、 室温保存。

　3)1.5 M Tris-HCl (pH8、8) 组份浓度:1.5 M Tris-HCl 配制量:1 L

　配制方法:

　1、 称量 181.7 g Tris 置于 1 L 烧杯中。

　2、 加入约 800 ml 得去离子水,充分搅拌溶解。

　3、 用浓盐酸调节 pH 值至 8、8。

　4、 将溶液定容至 1 L。

　5、 高温高压灭菌后,室温保存。

　注意:应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液得 pH 值随温度得变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液得 pH 值大约降低 0、03 个单位。

　4)3 M 醋酸钠(pH5 、2)

　组份浓度:3M 醋酸钠

　配制量:100ml 配制方法:

　1、称量 40.8g NaAc·3H2O 置于 100-200ml 烧杯中,加入月 40ml 得去离子水搅拌溶解

　2、加入冰醋酸调节 pH 值至 5、2 3、加去离子水将溶液定容至 100ml 4 高温高压灭菌后,室温保存。

　 5)PBS Buffer

　组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量:1 L

　配制方法:

　1、 称量下列试剂,置于 1 L 烧杯中。

　NaCl

　8g

　KCl

　0.2g

　Na2HPO4

　1.42g

　KH2PO4

　0.27g

　2、 向烧杯中加入约 800 ml 得去离子水,充分搅拌溶解。

　3、 滴加浓盐酸将 pH 值调节至 7、4,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。

　4、 高温高压灭菌后,室温保存。

　注意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充 1 mM CaCl2 与 0.5 mM MgCl2。

　 6)10 M 醋酸铵

　组份浓度:10 M 醋酸铵 配制量:100 ml 配制方法:

　1、 称量 77、1 g 醋酸铵置于 100～200 ml 烧杯中,加入约 30 ml 得去离子水搅拌溶解。

　2、 加去离子水将溶液定容至 100 ml。

　3、 使用 0、22 mm 滤膜过滤除菌。

　4、 密封瓶口于室温保存。

　注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

　 7) 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇 (25 : 24 : 1)

　配制方法:

　1、 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相得分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现得气泡。

　2、 配制方法:将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积得氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中 4℃保存。

　8)10 ％ (W/V) SDS

　组份浓度:10％ (W/V)SDS 配制量:100ml 配制方法:

　1、称量 10g 高纯度得 SDS 置于 100-200ml 烧杯中,加入约 80ml 得去离子水,68℃加入溶解

　2、滴加浓盐酸调节 pH 值至 7、2 3、将溶液定容至 100ml 后,室温保存。

　 9)2 N NaOH

　组份浓度:2 N NaOH 配制量:100 ml 配制方法:

　1、 量取 80 ml 去离子水置于 100～200 ml 塑料烧杯中(NaOH 溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。

　2、 称取 8 g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

　3、 待 NaOH 完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至 100 ml。

　4、 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

　10)2 、5 N HCl

　组份浓度:2、5 N HCl 配制量:100 ml 配制方法:

　1、 在 78、4 ml 得去离子水中加入 21、6 ml 得浓盐酸(11、6 N),均匀混合。

　2、 室温保存。

　 11)5 M NaCl

　组份浓度:5 M NaCl 配制量:1 L

　配制方法:

　1、 称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中,加入约 800 ml 得去离子水后搅拌溶解。

　2、 加去离子水将溶液定容至 1 L 后,适量分成小份。

　3、 高温高压灭菌后,4℃保存。

　 11)20 ％ (W/V) Glucose

　组份浓度:20％ (W/V) Glucose 配制量:100 ml 配制方法:

　1、 称取 20 g Glucose 置于 100～200 ml 烧杯中,加入约 80 ml 得去离子水后,搅拌溶解。

　2、 加去离子水将溶液定容至 100 ml。

　3、 高温高压灭菌后,4℃保存。

　12)Solution I( 质粒提取用)

　组份浓度:25 mM Tris-HCl(pH8、0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量:1 L

　配制方法:

　1、 量取下列溶液,置于 1 L 烧杯中。

　1M Tris-HCl(PH8、0)

　25ml

　0.5M EDTA(PH8、0)

　20ml

　20％Glucose(1.11M)

　45ml

　dH2O

　910ml

　2、 高温高压灭菌后,4℃保存。

　3、 使用前每 50 ml 得 Solution I 中加入 2 ml 得 RNase A(20 mg/ml)。

　13)Solution II( 质粒提取用)

　组份浓度:200mM NaOH,1％(W/V)SDS 配制量:500ml 配制方法:

　1、量取下列溶液,置于 500ml 烧杯中

　10％ SDS 50ml 2N NaOH 50ml

　2、加灭菌水定容至 500ml,充分混匀

　3、室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月

　注意:SDS 易产生气泡,不要剧烈搅拌 14)Solution III( 质粒提取用)

　组份浓度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量:500 ml 配制方法:

　1、 称量下列试剂,置于 500 ml 烧杯中。

　KOAc

　 147g

　 CH3COOH

　57、5ml

　2、 加入 300 ml 去离子水后搅拌溶解。

　3、 加去离子水将溶液定容至 500 ml。

　4、 高温高压灭菌后,4℃保存。

　15)0.5 M EDTA(pH8 、0)

　组份浓度:0.5 M EDTA 配制量:1 L

　配制方法: 称取 186、1 g Na2EDTA·2H2O,置于 1 L 烧杯中。

　2、 加入约 800 ml 得去离子水,充分搅拌。

　3、 用 NaOH 调节 pH 值至 8、0(约 20 g NaOH)。

　注意:pH 值至 8、0 时,EDTA 才能完全溶解。

　4、 加去离子水将溶液定容至 1 L。

　5、 适量分成小份后,高温高压灭菌。

　6、 室温保存。

　16)1 M DTT 组份浓度:1 M DTT 配制量:20 ml 配制方法:

　1、 称取 3、09 g DTT,加入到 50 ml 塑料离心管内。

　2、 加 20 ml 得 0、01 M NaOAc(pH5、2),溶解后使用 0、22 mm 滤器过滤除菌。

　3、 适量分成小份后,-20℃保存。

　17)10 mM ATP

　组份浓度:10 mM ATP 配制量:20 ml 配制方法:

　1、 称取 121 mg Na2ATP·3H2O,加入到 50 ml 塑料离心管内。

　2、 加 20 ml 得 25 mM Tris-HCl(pH8、0),搅拌溶解。

　3、 适量分成小份后,-20℃保存。

　一、常用贮液与溶液 1mol/L 亚精胺(Spermidine): 溶解 2.55g 亚精胺于足量得水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20℃。

　1mol/L 精胺(Spermine):溶解 3.48g 精胺于足量得水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20℃。

　10mol/L 乙酸胺(ammonium acetate):将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0、22um孔径得滤膜过滤除菌。

　10mg/ml 牛血清蛋白(BSA):加 100mg 得牛血清蛋白(组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶)于 9、5ml 水中(为减少变性,

　须将蛋白加入水中,而不就是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

　1mol/L 二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇 5g 得原装瓶中加 32、4ml 水,分成小份贮存于-20℃。或转移 100mg 得二硫苏糖醇

　至微量离心管,加 0、65ml 得水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。

　8mol/L 乙酸钾(potassium acetate):溶解 78.5g 乙酸钾于足量得水中,加水定容到 100ml。

　1mol/L 氯化钾(KCl):溶解 7.46g 氯化钾于足量得水中,加水定容到 100ml。

　3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g得三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液得pH至 5、2,再加水定容到 100ml。

　0、5mol/L EDTA:配制等摩尔得 Na2EDTA 与 NaOH 溶液(0、5mol/L),混合后形成 EDTA 得三钠盐。或称取 186.1g 得 Na2EDTA·2H2O 与 20g 得 NaOH,并溶于水中,定容至 1L。

　1mol/L HEPES:将 23、8gHEPES 溶于约 90ml 得水中,用 NaOH 调 pH(6、8-8、2),然后用水定容至 100ml。

　1mol/L HCl:加 8、6ml 得浓盐酸至 91、4ml 得水中。

　25mg/ml IPGT:溶解 250mg 得 IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于 10ml 水中,分成小份贮存于-20℃。

　1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2·6H2O 于足量得水中,定容到 100ml。

　100mmol/L PMSF:溶解 174mg 得 PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量得异丙醇中,定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹

　或贮存于-20℃。

　20mg/ml 蛋白酶 K(proteinase K):将 200mg 得蛋白酶 L 加入到 9、5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

　10mg/mlRnase(无 DNase)(DNase－free RNase):溶解 10mg 得胰蛋白 RNA 酶于 1ml 得10mmol/L得乙酸钠水溶液中(pH 5、0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L得 Tris－HCl 调 pH 至 7、5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套) 5mol/L 氯化钠(NaCl):溶解 29.2g 氯化钠于足量得水中,定容至 100ml。

　10N 氢氧化钠(NaOH):溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水得烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。

　10％SDS(十二烷基硫酸钠):称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 得水得烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。

　2mol/L 山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解 36.4g 山梨(糖)醇于足量水中使终体积为 100ml。

　100％三氯乙酸(TCA):在装有 500gTCA 得试剂瓶中加入 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制) 2、5％ X－gal(5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷):溶解 25mg 得 X－gal 于 1ml 得二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。

　100×Denhardt 试剂(Denhardt"s regent) 成分及终浓度

　配制 100ml 溶液各成分得用量

　2％聚蔗糖(Ficoll,400 型)

　2％聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)

　2％BSA(组分 V)

　水

　2g

　2g

　2g

　加水至总体积为 100ml

　依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。

　10× 标准 DNA 连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)( 粘端、平端连接) 成分及终浓度

　配制 10ml 溶液各成分得用量

　0、5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)

　0、5mg/ml BSA(组分 V)(可选)

　水

　5ml 1mol/L 贮液

　1ml 1mol/L 贮液

　1ml 1mol/L 贮液

　200ul 100 mmol/L 贮液

　50ul 1 mmol/L 贮液

　0、5ml 10 mg/mL 贮液

　2、25ml

　 将配制好得缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。

　100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)

　可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液,-80℃可贮存至少 6 个月。

　10mmol/L dNTP 混合液 成分及终浓度

　配制 20ul 溶液各成分得用量

　10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP

　10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水

　2ul 100 mmol/L dATP 贮液

　2ul 100 mmol/L dCTP 贮液

　2ul 100 mmol/L dGTP 贮液

　2ul 100 mmol/L dTTP 贮液

　12ul

　20％PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度

　配制 10ml 溶液各成分得用量

　质量浓度为 20％聚乙二醇

　2、5mol/L 氯化钠

　水

　20g

　50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠

　补足 100ml

　 加聚乙二醇于含有氯化钠得烧杯中,加水至终体积 100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

　20×SSC 成分及终浓度

　配制 1L 溶液各成分得用量

　300mmol/L 柠檬酸三钠(二水) 3mol/L 氯化钠

　水

　88.2g

　175.3g

　补足 1L

　 溶解柠檬酸三钠(二水)与氯化钠于约 0.9L 水中,加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7、0,用水补足体积至 1L。

　DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水

　加 100ul DEPC 于 100ml 水中,使 DEPC 得体积分数为 0、1％。在 37℃温浴至少 12h,然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min,以使残余得 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应,不可用 DEPC处理 Tris 缓冲液。

　甲酰胺(deionized formamide)

　直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺得玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h,可去除甲酰胺中得离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。

　磷酸缓冲液(phosphate buffer)

　 按照下表所给定得体积,混合 1 mol/L 得磷酸二氢钠(单碱)与 1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需 pH 得磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 得磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解 138g 于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为 1L。

　1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml) 最终 pH 值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6、0 6、1 6、2 6、3 6、4 6、5 6、6 6、7 6、8 6、9 7、0 7、1 7、2 TE( 用于悬浮与贮存 DNA) 成分及终浓度 制 配制 100ml 溶液各成分得用量 10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7、4-8、0,25℃) 200ul 0、5 mol/L EDTA(pH 8、0)

　98、8ml Tris 缓冲...

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